Standardní hematologické postupy v preklinických studiích toxicity jsou většinou prováděné na savcích, velmi často se jako hematotoxikologické modely používají bezobratlí,protože mohou být využiti při screeningu myelotoxicity.
V této práci jsme zkoumali haemocyty Culex pipiens jako nový potenciální alternativní hematologický biomodel in vivo. Preparáty pro mikroskopickou analýzu přichystané z hemolymfy byly obarvené Pappenheimovo metodou pro zvýraznění morfologie a toluidinovou modří a AgNOR pro zvýraznění jadérek. Mikroskopické snímky byly zpracovány obrazovou analýzou,kde byla vyhodnocena velikost buňky, jádra a jadérka. Bylo nalezeno šest druhů haemocytů: granulocyty, prohemocyty, spherulocyty, plasmatocyty, adipohemocyty a oenocyty.
Díky obrazové analýze jsme vytvořili morfometrický profil každého typu haemocytů a stanovili jsme jaderný koeficient. Popsali jsme významné rozdíly mezi velikostí prohemocytů, plasmocytů a oenocytů. Na základě velikosti jadérek jsme rozdělili haemocyty na další dvě významné skupiny. Obrazová analýza se zdá býti velmi nápomocnou při rozlišení různých haemocytárních linií, ale nemůžeme ji obecně použít pro rozlišení bez osobní kontroly díky přítomnosti statistických rozdílů nalezených pouze u některých srovnání buněčných typů.
Anotace v angličtině
Standard haematological procedures in preclinical toxicity studies are mostly carried out on mammals, more recent haematotoxicological models represent invertebrates because they can be used in the screening of myelotoxicity.
In the present study, we examined haemocytes of Culex pipiens as a new potential alternative haematological in vivo model. Preparations for microscopic analysis were made from the hemolymph stained by Pappenheim's method for overstriking morphology and by toluidin blue and AgNOR for overstriking nucleoles. Microscopic photos were processed by image analysis and size of cells, nuclei and nucleoli were evaluated. Six types of haemocytes were found: granulocytes, prohemocytes, spherulocytes, plasmatocytes, adipohemocytes and oenocytes.
Thanks to image analysis we made a morfometric profile of each type of haemocytes and set the nucleolar coefficient. We described significant differences among prohemocytes, plasmocytes and oenocytes size. On the grounds of nucleoles size we divided haemocytes to next two significant groups. Image analysis seems to be very helpful for distinction among various haemocyte lines but we cant use it for generally separation without personal control thanks to presence of statistically significant findings for only some comparisons cell types.
AgNOR,Culex pipiens,Haemocytes,Image analysis,Nucleolar coefficient,
Orometry,Pappenheim staining,Toluidine blue
Rozsah průvodní práce
45 s. ( 56 412 znaků)
Jazyk
CZ
Anotace
Standardní hematologické postupy v preklinických studiích toxicity jsou většinou prováděné na savcích, velmi často se jako hematotoxikologické modely používají bezobratlí,protože mohou být využiti při screeningu myelotoxicity.
V této práci jsme zkoumali haemocyty Culex pipiens jako nový potenciální alternativní hematologický biomodel in vivo. Preparáty pro mikroskopickou analýzu přichystané z hemolymfy byly obarvené Pappenheimovo metodou pro zvýraznění morfologie a toluidinovou modří a AgNOR pro zvýraznění jadérek. Mikroskopické snímky byly zpracovány obrazovou analýzou,kde byla vyhodnocena velikost buňky, jádra a jadérka. Bylo nalezeno šest druhů haemocytů: granulocyty, prohemocyty, spherulocyty, plasmatocyty, adipohemocyty a oenocyty.
Díky obrazové analýze jsme vytvořili morfometrický profil každého typu haemocytů a stanovili jsme jaderný koeficient. Popsali jsme významné rozdíly mezi velikostí prohemocytů, plasmocytů a oenocytů. Na základě velikosti jadérek jsme rozdělili haemocyty na další dvě významné skupiny. Obrazová analýza se zdá býti velmi nápomocnou při rozlišení různých haemocytárních linií, ale nemůžeme ji obecně použít pro rozlišení bez osobní kontroly díky přítomnosti statistických rozdílů nalezených pouze u některých srovnání buněčných typů.
Anotace v angličtině
Standard haematological procedures in preclinical toxicity studies are mostly carried out on mammals, more recent haematotoxicological models represent invertebrates because they can be used in the screening of myelotoxicity.
In the present study, we examined haemocytes of Culex pipiens as a new potential alternative haematological in vivo model. Preparations for microscopic analysis were made from the hemolymph stained by Pappenheim's method for overstriking morphology and by toluidin blue and AgNOR for overstriking nucleoles. Microscopic photos were processed by image analysis and size of cells, nuclei and nucleoli were evaluated. Six types of haemocytes were found: granulocytes, prohemocytes, spherulocytes, plasmatocytes, adipohemocytes and oenocytes.
Thanks to image analysis we made a morfometric profile of each type of haemocytes and set the nucleolar coefficient. We described significant differences among prohemocytes, plasmocytes and oenocytes size. On the grounds of nucleoles size we divided haemocytes to next two significant groups. Image analysis seems to be very helpful for distinction among various haemocyte lines but we cant use it for generally separation without personal control thanks to presence of statistically significant findings for only some comparisons cell types.
AgNOR,Culex pipiens,Haemocytes,Image analysis,Nucleolar coefficient,
Orometry,Pappenheim staining,Toluidine blue
Zásady pro vypracování
1)Současný stav problematiky: dosud nebyl nalezen alternativní model pro lidské cirkulující krvinky. Rovněž neexistuje pro tento účel, vhodný biomodel in vitro. V odborné literatuře byla poslední dobou postavena hypotéza, zda-li by jako vhodný hematotoxikologický biomodel mohly být použity haemocyty bezobratlých živočichů. To má též konsekvence etické. Školitel již na toto téma publikoval v impaktovaných časopisech.
2)Cíl práce: cílem je zpracovat rešerši související literatury v daném kontextu a zvládnout základní metody obrazové analýzy vhodné pro laboratorní hematologii.
3)Předpokládané hypotézy: Standardizace morfologických ukazatelů
4)Popis metodiky: K mé práci využiji haemocyty experimentálního živočicha Culex, zhotovím z nich mikroskopické preparáty pro mikroskop Nikon a použiji systém NIS-Elements AR obrazové analýzy . Pracovat budu pod vedením školitele podle pravidel obvyklých ve srovnávací hematologii. Dosažené výsledky uvedu ve své bakalářské práci včetně jejich diskuze. Předložená práce bude po formální stránce sestavena dle předpisů ZSF JU a pravidel, které jsou v publikacích laboratorní medicíny obvyklé.
5)Předpokládané využití v praxi: mé výsledky mohou být využity pro screening hematotoxických účinků xenobiotik.
Zásady pro vypracování
1)Současný stav problematiky: dosud nebyl nalezen alternativní model pro lidské cirkulující krvinky. Rovněž neexistuje pro tento účel, vhodný biomodel in vitro. V odborné literatuře byla poslední dobou postavena hypotéza, zda-li by jako vhodný hematotoxikologický biomodel mohly být použity haemocyty bezobratlých živočichů. To má též konsekvence etické. Školitel již na toto téma publikoval v impaktovaných časopisech.
2)Cíl práce: cílem je zpracovat rešerši související literatury v daném kontextu a zvládnout základní metody obrazové analýzy vhodné pro laboratorní hematologii.
3)Předpokládané hypotézy: Standardizace morfologických ukazatelů
4)Popis metodiky: K mé práci využiji haemocyty experimentálního živočicha Culex, zhotovím z nich mikroskopické preparáty pro mikroskop Nikon a použiji systém NIS-Elements AR obrazové analýzy . Pracovat budu pod vedením školitele podle pravidel obvyklých ve srovnávací hematologii. Dosažené výsledky uvedu ve své bakalářské práci včetně jejich diskuze. Předložená práce bude po formální stránce sestavena dle předpisů ZSF JU a pravidel, které jsou v publikacích laboratorní medicíny obvyklé.
5)Předpokládané využití v praxi: mé výsledky mohou být využity pro screening hematotoxických účinků xenobiotik.
Seznam doporučené literatury
Beuter E. et al. (2001): Williams Hematology. McGraw-Hill, New York.
Berger J. (1987): Haematological preclinical recording of adverse drug reactions - current status, problems, and needs. Part II. Diagnostic aspects. Fol. Haematol. 114: 16 - 41.
Sakalová et al. (1995): hematológia a transfuziologia. Osveta, Martin.
Berger J. (2008): Does precclinical trstiny on insects help to predict human myelotoxic potentials? AATEX 14: 539-541.
Seznam doporučené literatury
Beuter E. et al. (2001): Williams Hematology. McGraw-Hill, New York.
Berger J. (1987): Haematological preclinical recording of adverse drug reactions - current status, problems, and needs. Part II. Diagnostic aspects. Fol. Haematol. 114: 16 - 41.
Sakalová et al. (1995): hematológia a transfuziologia. Osveta, Martin.
Berger J. (2008): Does precclinical trstiny on insects help to predict human myelotoxic potentials? AATEX 14: 539-541.